تولید آلبومین سرم انسانی نوترکیب در مخمر متیلوتروف هانسونلا پلی مورفا

  چکید ه   سابقه و هدف   ‌ آلبومین عمده‌ترین پروتئین پلاسما می‌باشد. این پروتئین نه تنها به عنوان حامل بسیاری از ماکروملکول‌ها در بدن نقش عمده‌ای ایفا می‌کند بلکه نقش مهمی در تنظیم فشار اسمزی دارد. امروزه از آلبومین در درمان خونریزی‌ها و سوختگی‌های شدید و هم‌چنین در درمان افراد مبتلا به کمبود آلبومین استفاده می‌شود. مصرف سالیانه آلبومین در دنیا حدود 450 تن می‌باشد. به‌منظور برطرف کردن این نیاز و تولید آلبومین عاری از هرگونه آلودگی از روش‌های بیوتکنولوژی استفاده گردیده است.   در این تحقیق از مخمر هانسونلا پلی مورفا که امروزه در سطح وسیعی به ‌منظور تولید پروتئین‌های هترولوگ به‌کار برده می‌شود،‌ برای آلبومین انسانی نوترکیب استفاده گردیده است.   مواد وروش‌ها   مطالعه انجام شده از نوع تجربی (experimental) است. به‌منظور تولید پروتئین آلبومین نوترکیب و هم‌چنین بهینه ‌سازی شرایط تولید از سوش RB-11 هانسونلا پلی ‌مورفا به ‌عنوان میزبان استفاده گردید. پلاسمید pFMPT-MFα حاوی cDNA آلبومین تحت کنترل پروموتور FMD با استفاده از روش الکتروپوریشن داخل میزبان شد و سپس تحت شرایط مختلف با بررسی پارامترهایی نظیر زمان انکوباسیون، محیط کشت، دما و مهارکننده‌های پروتئازی بیان آلبومین مورد بررسی قرار گرفت. آلبومین تولید شده با روش‌هایی هم‌چون الایزا، HPLC و Western Blot ارزیابی شد.   یافته‌ها   درطی این تحقیق چهارعامل مهم دربیان پروتئین آلبومین موردمطالعه قرارگرفت ومشخص گردید که از بین سه محیط derepression ، YNB 1% Glycerol ، YP 1% Glycerol ،‌ YNB 1% Glycerol with buffer ، محیط کشت YNB 1% Glycerol with buffer و از بین سه دمای 25،‌30 و37 درجه سانتی گراد دمای 37 درجه و از بین سه زمان انکوباسیون، 24، 48 و 72 ساعت، مدت 48 ساعت با حضور آنتی ‌پروتئازها بیشترین میزان تولید آلبومین به‌دست آمد.   نتیجه گیری   بالاترین میزان تولید شده تحت شرایط بهینه به‌دست آمده در مقیاس آزمایشگاهی، mg/l 6/17 را نشان داد. از سوی دیگر با استفاده از این سوش در شرایط نیمه صنعتی، میزان mg/l 478 آلبومین تولید شد و این امر نشان‌دهنده آن است که می‌توان تولید پروتئین آلبومین را در شرایط انبوه ادامه داد.   کلمات کلیدی: آلبومین سرم انسانی، مخمر هانسونلاپلی مورفا، آلبومین نوترکیب